Аргинин.Ру - всё об аргинине  
В начало
Контакты
Рекламодателям
 


молекула L-arginine
молекула L-arginine

Нобелевские лауреаты 1998 года:

Ф.Ферчготт

Л.Игнарро

Ф.Мурад

аргинин по 1000 мг 90 капсул производства Solgar

Про аргинин:

Что такое аргинин?
Откуда берется аргинин?
Механизм действия.

Аргинин в медицине:

Сердечная недостаточн.
Стенокардия
Гипертония
Онкология (рак)
Геронтология (старение)
Атеросклероз
Травмы
Ожоги
Гормональный обмен
ВИЧ/СПИД

Где купить аргинин

аргинин по 1000 мг 90 капсул производства Solgar

Библиотека статей:




Deprecated: Methods with the same name as their class will not be constructors in a future version of PHP; SAPE_base has a deprecated constructor in /home/ih72672/public_html/arginine.ru/1152e72650d4093c1a42c7534a7d7797/sape.php on line 21

Deprecated: Methods with the same name as their class will not be constructors in a future version of PHP; SAPE_client has a deprecated constructor in /home/ih72672/public_html/arginine.ru/1152e72650d4093c1a42c7534a7d7797/sape.php on line 615

Deprecated: Methods with the same name as their class will not be constructors in a future version of PHP; SAPE_context has a deprecated constructor in /home/ih72672/public_html/arginine.ru/1152e72650d4093c1a42c7534a7d7797/sape.php on line 1177

Deprecated: Methods with the same name as their class will not be constructors in a future version of PHP; SAPE_articles has a deprecated constructor in /home/ih72672/public_html/arginine.ru/1152e72650d4093c1a42c7534a7d7797/sape.php on line 1529

Warning: Use of undefined constant _SAPE_USER - assumed '_SAPE_USER' (this will throw an Error in a future version of PHP) in /home/ih72672/public_html/arginine.ru/1152e72650d4093c1a42c7534a7d7797/sape.php on line 1090
Авторы: Saxl RL, Changchien LM, Hardy LW, Maley F.
Дата:2001 год, май.

Parameters affecting the restoration of activity to inactive mutants of thymidylate synthase via subunit exchange: further evidence that thymidylate synthase is a half-of-the-sites activity enzyme.

  автоматический перевод
In a previous study we demonstrated that Escherichia coli thymidylate synthase activity could be restored completely by incubating basically inactive mutants of this enzyme at room temperature with R(126)E, another inactive mutant [Maley, F., Pedersen-Lane, J., and Changchien, L.-M. (1995) Biochemistry 34, 1469-1474]. Since only one of the enzyme's two subunits possessed a functional active site and the restoration of activity could be titrated to be equivalent to that of the wild-type enzyme's specific activity, it was proposed that thymidylate synthase was a half-of-the-sites activity enzyme. We now provide additional support for this thesis by presenting an in-depth analysis of some conditions affecting the restoration of enzyme activity. For this purpose, we employed two mutants with marginal thymidylate synthase activity, Y(94)A and R(126)E. The parameters that were examined included pH, concentration of protein, temperature, and urea concentration, all of which influenced the rate of activity restoration. It was found, surprisingly, that by maintaining the amount of each protein constant, while increasing the volume of solution, the rate and total activity restored was greatly enhanced. Increasing the pH from 6.0 to 9.0 markedly increased the rate at which the optimal activity was restored, as did increasing the temperature from 4 to 40 degrees C. A similar effect was obtained when the incubation of the mutants was conducted at 4 degrees C in the presence of 1.5 M urea, a temperature at which activity is restored extremely slowly. Raising the pH to 9.0 resulted in an almost instantaneous restoration of activity at 4 degrees C. The manner in which thymidylate synthase activity is restored from the mutants in the presence of varying concentrations of ethanol, ethylene glycol, and glycerol suggests that changes in subunit interaction and enzyme conformation are in part responsible for the observed differences. Most significantly, at solution levels of 10%, ethanol was found to activate, while ethylene glycol inhibited slightly and glycerol was somewhat more inhibitory. At a concentration of 20%, ethanol inhibited rather strikingly, ethylene glycol was slightly more inhibitory than at 10%, and glycerol was strongly inhibitory. Since the net result of these findings is the suggestion that the restoration of thymidylate synthase activity is due to a separation of the mutant dimers into their respective subunits, followed by their recombination to an active heterodimer, evidence for this phenomenon was sought by separating the recombined dimers using nondenaturating polyacrylamide gel electrophoresis. Sequence analysis of the isolated homo- and heterodimers clearly demonstrated that the active enzyme is a product of subunit exchange, one that is very efficient relative to the wild-type enzyme, which did not exchange subunits unless denatured.   В предыдущем исследовании мы показали, что Эшерихия коли thymidylate синтазы активность может быть восстановлена полностью инкубаторов в основном бездействуют мутантов этого фермента при комнатной температуре с Р (126) E, другой неактивных мутанта [Мали, F., Педерсен-Lane, J., и Чангчиен, L.-M. (1995) Биохимия 34, 1469-1474]. Поскольку лишь один из ферментов двух подсистем обладает функциональными Активные сайта и восстановления активности может быть titrated быть эквивалентно, что из дикого фермента в конкретной деятельности, то было предложено, чтобы thymidylate синтаза представляет собой половину самой сайтов активность фермента. Мы сейчас предоставить дополнительную поддержку этого тезиса, представив углубленный анализ некоторых условий, влияющих на восстановление активности фермента. Для этой цели мы занятых два мутантов с маргинальным thymidylate синтазы деятельности, Y (94) А и Р (126) E. Те параметры, которые были рассмотрены, включенных рН, концентрация белка, температуры и концентрации мочевины, которые влияют на уровень активности реставрации. Было установлено, как это ни удивительно, что, сохраняя размер каждого белка неизменным, в то время как увеличение объема раствора, скорость, и общая деятельность была восстановлена в значительной степени расширить. Повышение рН от 6,0 до 9,0 заметно возросла скорость, на которой происходит оптимальное деятельность была восстановлена, равно как и повышение температуры от 4 до 40 ° С. Аналогичный эффект был получен, когда инкубационный из мутантов был проведен на 4 градуса в Присутствие в 1,5 М мочевины, температура на которой будет восстановлена крайне медленно. Повышение рН до 9,0 привело к почти мгновенной восстановления активности на 4 ° С. То, thymidylate синтазы активность восстанавливается от мутантов в присутствии различных концентраций этанола, этиленгликоля и глицерина предположить, что изменения в ПОДРАЗДЕЛЕНИЕ взаимодействия и конформации фермента в части, ответственных за наблюдаемые различия. Весьма важно, что решение на уровне 10%, этанол был обнаружен для активации, в то время как этилен гликоль мешает немного глицерина и несколько более тормозящей. При концентрации 20%, этанол мешает, а поразительно, этилен гликоль был немного больше, чем ингибирующее на 10% и глицерина решительно тормозящей. С Конечным результатом этих выводов является предположение о том, что восстановление thymidylate синтазы деятельность из-за разделения мутанта димеров в их соответствующие подразделения, а затем их рекомбинации с активной heterodimer, доказательств этого явления была запрошена путем отделения recombined димеров с помощью nondenaturating полиакриламидном гель-электрофореза. Последовательность анализа отдельных гомо-и heterodimers четко продемонстрировали, что активное фермента является продуктом ПОДРАЗДЕЛЕНИЕ обмена, который является очень эффективным по сравнению с диким фермента, который не обмен подразделения, если денатурированные.

к списку статей за 2001 год (en)

в библиотеку